问：产品阐明书中给出的胶乳粒径是均匀粒径吗？

答：产品阐明书中给出的胶乳粒径（Diameter）是均匀粒径。

问：怎样选择胶乳微球的粒径？

答：一样平常选择粒径小的胶乳微球，则必要的抗体量就多，精细度和线性绝对较好，而选择粒径大的胶乳微球性，则所需抗体少，精细度和线性绝对较差，绝对于小球，大球的敏捷度较好。

问：一样平常状况下亚博所利用的微球的浓度大约是几多？

答：整个测定系统中，微球的浓度约莫在0.01%左右，固然这与试剂自己划定的线性有干系。

问：在利用离心办法偶联乳胶微球，一样平常必要多大的（绝对）向心力[xiàng xīn lì]？

答：必要多大的向心力[xiàng xīn lì]和所利用的乳胶微球有关，一样平常70nm左右的微球大约13000g/min 30min以上，粒径越小所需工夫越长，向心力[xiàng xīn lì]越大。

问：卵白（抗体）与微球偶联前，是不是微球的活化工夫越长，服从越好？

答：羧基微球的活化所需工夫很短，一样平常以10-20分钟为宜，永劫间的活化反而会低落偶联服从。

问：由于抗体不但是FC的氨基酸上有NH2，是不是表现它可以在任何偏向与EDCA活化微球偶联呢？假如是如许，是不是会影响抗体与抗原的特异性反响？

答： 现实确实云云，固然由于抗体的空间折叠方法和F_C端疏水性强，因而偶联反响的绝大少数产生在Fc端，反抗体与抗原的联合的影响不大。

问：胶乳微球与抗体偶联后，事先没发明有凝聚，但隔夜后发明有凝聚，这是什么缘故原由？怎样控制和制止？

答：这种状况一样平常是偶联服从低的缘故原由。当系统中卵白不敷或是别的缘故原由，使微球外表在交联后还空出很多反响基团时，这些基团又可以与相连微球上的卵白反响，后果是把球又拉在一同了，以是有收集。可以加一些阻断剂 办理,罕见的是BSA，别的，也可进步微球的交联率。但为什么是过一段工夫后才呈现凝聚呢，这是由于微球偶联上卵白后，互相之间由于携携同种电荷的干系，比力波动（以是能以胶体样存在），只要当偶然互相碰撞，遇上相互的反响基团时才干联合。

3、胶乳的自凝征象怎样控制和制止？

答：胶乳自凝与很多要素有关，如高电解质浓度、外表价电荷被中和、或置于某些倒霉情况如冷冻时。假如电解质浓度降低到某一程度，使得外表的价负荷被遮蔽，胶乳微球之间产生打仗，于是便发生凝聚，故高离子强度的缓冲溶液不该利用，缓冲溶液的的浓度不要凌驾50mM，但有些CML胶乳微球具有高电荷密度，则也可以耐受较高的离子强度。对负电荷胶乳微球，不克不及利用阳电荷的缓冲溶液如Tris缓冲溶液，由于能使电荷中和而凝聚。在临时贮藏时，悬浮介质的pH值应至多坚持在比胶乳微球外表基团的pKa值高1-2pH单元。高浓度的胶乳微球容易促使胶体不波动，故胶乳微球的浓度只管即便以低浓度为宜，胶乳微球也不克不及受冷冻，不然会凝聚。

问：抗体偶联至羧基微球后，即时检测结果很好，但置于37度 2天后，抗体活性好像降落很大，什么缘故原由？

答：这种状况大约因此下状况所致：一、乳胶微球含有外表活性剂，招致胶乳本身呈现自凝征象，可以经过显微镜举行察看，假如是胶乳含有活性剂，则在偶联之行进行洗濯，包管偶联的胶乳微球没有收集。二、假如共价联合反响是乐成的而抗体活性失活云云敏捷，最罕见的缘故原由是抗体质量差或试剂过时所致，并且还会呈现一个自在活动白色粉末、继续性团块等，这表标明试剂已被净化。

问：胶乳溶液用什么缓冲液多大离子强度保管波动性最好？

答：一样平常常用的是低浓度的Goods缓冲液，如MOPSO、MES、HEPES等缓冲液，浓度在25-50mmol/L。

问：胶乳微球偶联抗体后与抗原举行反响，但反响不分明，是什么缘故原由所致？

答：⑴抗原和抗体不婚配；⑵包被的抗体量下足；⑶抗体利用量虽多，但偶联服从低。

问：怎样选择胶乳试剂的波长？

答：胶乳试剂随着检测波长的增长吸光度低落，为了包管试剂检测历程中不凌驾吸光度的检测限，一样平常胶乳试剂的波长选择在546-600nm左右。

微球外表基团品种及其反响

共价联合胶乳微球的参考办法（以下内容均为外洋文献翻译过去的）

A. 一步法

1. 配制50 mM 的MES反响缓冲溶液，pH值为6.0；

2. 将卵白质消融于反响缓冲溶液中，其浓度为10mg/ml；

3. 用反响缓冲溶液浓缩胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）；

4. 将上述卵白质溶液与胶乳微球混和，混和后在室温培养20分钟；

5. 用去离子水配制EDAC溶液，浓度为10 mg/ml（52μmol/ml）；

6. 取盘算量的EDAC溶液加到卵白质与胶乳微球混淆液中；

7. 用0.1 M氢氧化钠（NaOH）溶液调解该反响混淆液的pH值至 6.5±0.2，在摇床室温培养2小时；

8. 将未联合的卵白质撤除，贮藏于缓冲溶液中。

B. 二步法

复杂二步法

1. 用反响缓冲溶液浓缩胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）；

2.1ml胶乳微球悬浮液，参加20 mg EDAC，在室温培养40分钟，在20分钟后第二次参加20 mg/ml；

3.用相称体积的该缓冲溶液来洗濯胶乳微球，离心，用1倍体积的缓冲溶液反复处置；

4.将卵白质消融于50-100mM的MES缓冲溶液中，卵白质浓度为1mg/ml；

5.再将胶乳微球悬浮于去离子水或联合的缓冲溶液中，敏捷参加消融的卵白质，37℃搅拌反响3小时；

6.按1ml反响混淆液参加2.5 μl乙醇胺混淆，搅拌反响10分钟；

7.撤除未联合的卵白质，贮藏与储存的缓冲溶液中。

天生NHS-酯的两头体二步法

1.每ml反响混淆物参加下列各物：

a.去离子水是最初容积为1.0 ml；

b.0.1 ml的10x的储备缓冲溶液，其pH值为6.0-6.5（一样平常可用0.5 M MES缓冲溶液）；

胶乳微球终极浓度为1%（W/V）；

c.0.23 ml的50 mg/ml 的NHS在去离子水中的溶液；

d.19.2 mg/ml (100 mM)的EDAC在去离子水中的溶液（注5、6）；

2.在室温将此混淆物反响15-30分钟，不停搅拌；

3.用MES缓冲液或纯化水洗濯胶乳微球悬浮物，撤除未反响的NHS和EDAC；

4.重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为1%（w/v）；

5.将联合的卵白质溶于50-100mM 的MES缓冲溶液中，浓度为1 mg/ml；

6.立刻参加卵白质溶液（胶乳微球、卵白质弛缓冲溶液的浓度辨别为0.5%(w/v)、0.5 mg/ml、25-50 mM）；

7.将混淆物反响至多2小时，悄悄搅拌；

8. 按1ml反响混淆液参加2.5 μl乙醇胺混淆，搅拌反响10分钟；

9.撤除未联合的卵白质和乙醇胺，贮与相宜的储存缓冲溶液中。

C、卵白质与带醛基的胶乳微球反响

带醛基的胶乳微球是疏水性的胶乳微球，能吸附并能与卵白质在中性pH条件下天生Schiff碱，这是脂肪族醛基与卵白质的氨基产生的反响（赖氨酸的伯胺）。这些胶乳微球不需事前活化而天生共价链。Schiff碱的天生是可逆反响。此Schiff碱能被氰基氢硼化钠（sodium cyanoborohydride）反响复原至波动的烷基胺。当肽类或其他有单一反响氨基的分子与带醛基的胶乳微球联合时，由于复原而趋势波动。

上面阐明卵白质与带醛基的胶乳微球联合的办法：

1. 配制50 mM的反响缓冲溶液，pH值为7.0-7.5；

2. 配制10 mg/ml的卵白质在反响缓冲溶液中的溶液；

3. 配制1%(w/v) 带醛基胶乳微球在反响缓冲溶液中的悬浮液；

4. 将1份卵白质溶液和10份胶乳微球悬浮液混和，在室温反响2小时；

5. 撤除未联合的卵白质；

6. 贮藏胶乳微球结和物与相宜的储存缓冲溶液中。